Herpesin diagnoosi

Diagnoosi herpes perustuu kulusta klassinen viruksen leviämistä on herkkiin soluviljelmiin, immunofluoresenssilla ja serologisia menetelmiä, suorittaa colposcopic tutkimuksia käyttämällä nykyaikaisia molekyylibiologisten menetelmien (PCR, dot-hybridisaatio), joka mahdollistaa diagnosoida kaikkia herpesvirus ryhmä, kuten HHV-6: n ja HHV-7 tyyppejä.

Herpesinfektion laboratoriodynamiikan menetelmät

Tärkeimmät menetelmät HSV: n erittämiseen tai viruspartikkeleiden ja / tai niiden komponenttien havaitsemiseen	Lisämenetelmät, joilla pyritään havaitsemaan HSV: n vasta-aineet ihmisen kehon biologisissa nesteissä
HSV: n eristäminen solujen ja eläinten herkissä viljelmissä Suora ja immuunelektronimikroskopia Suorat ja välilliset makrotaloudelliset rahoitusmahdollisuudet IFA Molekyylibiologiset menetelmät Latexin agglutinaatioreaktio	Neutralointireaktio RSK HSV-1,2-vasta-aineiden määrittäminen ei-rakenteellisille proteiineille

76%: lla potilaista on HSV-2: n aiheuttama sukupuolielinten herpes (GH) ja 24% HSV-1 -tyyppinen. Ja GG moninfioituna tapahtui vain 22%: lla potilaista, 78% tapauksista havaittiin mikrobiyhteyksiä. 46%: lla potilaista havaittiin kahden patogeenin aiheuttamat loistaudit, mukaan lukien klamydia 40%: lla tapauksista. Vähemmän usein havaitut ruusut, Trichomonas, gonokokit.

27%: lla potilaista parasitocenoosi edusti kolme ja 5,2% neljästä patogeenistä. Ja useammin klamydian yhdistelmä oli Gardnerellan ja Candida-sienten kanssa. Nämä tiedot perusteltua tarvetta perusteellisesti bakteriologisesta tutkimuksesta potilaiden YY tunnistaa taudinaiheuttaja yhdistelmät sekä perusteellisen tutkimuksen patogeneesin Sekainfektioissa urogenitaalialueen, joka mahdollistaisi eriytetyn monimutkainen hoito HSV-infektio.

Tutkittavat materiaalit HSV: n eristämisessä riippuen herpetisen vaurion lokalisoinnista

Vaurioiden lokalisointi	Vesikkelien sisältö	Solun kaavinta				SMZ	Imeytä keuhkoputkista	Ohutsuolikoepala	Veri
		1	2	3	4
Nahka	+								+
Katse			+						+
Sukupuolielimet				+					+
Peräaukko	+				+				+
Suu	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Keuhkot		+					+		+
Maksa								+	+
Synnynnäinen herpes	+	+	+				+		+

Sytomegalovirusinfektion laboratoriodynamiikan menetelmät

Menetelmät	Tulosten saaminen	Muistiinpanot
Virologinen
Elektronimikroskopia	3 tuntia	Malodostupen
Viruksen eristäminen soluviljelmässä (CPD)	4-20 päivää	Vakio, hidas
Varhaisen AH: n immunofluoresenssivärjäys monoklonaalisilla vasta-aineilla	6 tuntia	Vähemmän tarkka
TSITOLOGICHESKIY	2-3 tuntia	Vähemmän tarkka
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 päivää	Standardi
Ssubsistence	1 päivä	Aikaa vievä
RIF	6 tuntia	Yksinkertainen ja tarkka
NRIF	6 tuntia	Monimutkainen
RIMF	6 tuntia	Monimutkainen
IFA (IgM, TO)	6 tuntia	Nopea, yksinkertainen
Immunoblottaus	6 tuntia	Kallis
Molekyylibiologista
MG	5-7 päivää	Kallis, aikaa vievä
PCR-	3 tuntia	Kallis

Menetelmät herpes zoster -viruksen diagnosoimiseksi

Diagnostiset menetelmät	Laboratorio menetelmät
EPÄSUORISTA
Jako	Kanavakulttuuri, kana-alkioita, laboratoriot eläimiä, yhteisviljeleminen salliviin soluihin tai auttaja-viruksiin
Isolaattien tunnistaminen	Neutralointireaktio, DSC, IF, IPPE, sakka-isolaattien reaktio, agglutinaatio, IF
SUORA
Soluoppi	Smears: väri immunofluoresenssi
Histologia	Solun patomorfologia
Rakenne	Embryomikroskooppi, immunoelektroninen mikroskopia
Antigeenien määritys	IF, PIÉF, RIM, IFA
Vasta-aineiden paikallisen tuotannon määrittäminen	IgM, IgG, IgA: IFA, RIA
Molekyylibiologiset lähestymistavat	Molekyylihybridisaatio, PCR

Herpes zoster -viruksen aiheuttama infektion laboratoriodiagnoosi

Diagnostiset ongelmat	Menetelmät	Odotetut tulokset
Akuutti ensisijainen infektio	1	Havaitseminen 2 tunnin kuluttua
	2	Vasta-aineiden määrä kasvaa hitaasti
	3	Läsnä 3 päivää infektion jälkeen
Akuutti aktivoiva infektio	1	ULV: n havaitseminen 2 tunnissa
	2	Vasta-aineiden määrä kasvaa hitaasti
	4	Läsnä 4 päivää ihottumien ilmenemisen jälkeen

1. WIEF: n vesikkelien nesteen määritys;
2. serologia: DSC, ELISA, jonka tarkoituksena on tunnistaa
3. Serologia: ELISA, jonka tarkoituksena on havaita IgM;
4. serologia: ELISA, jonka tarkoituksena on havaita IgA, IgM.

Menetelmät herpes zoster -viruksen aiheuttaman infektion immuunivasteen osoittamiseksi

Lähestymistapa	Menetelmä
Lisätty vasta-ainetiitterin havaitseminen toisella seerumilla	RSK, RTGA, RPGA, neutralointireaktio IF, RIM, ELISA
IgG, Ig A -luokka-spesifisten vasta-aineiden havaitseminen ensimmäisessä seeruminäytteessä	IFA, IF, RIM, lateksiagglutinaatio

Potilaiden seerumin serologisen tutkimuksen tulosten tulkinta herpesvirusinfektioilla (ELISA)

Nimi infektio / merkki	Infektioiden keskimääräiset kynnysarvot
	Analyysitulokset	Tulkinta
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positiivinen 1-6 Positiivinen 6-10 Positiivinen> 10 Negatiivinen positiivinen 100-300 Negatiivinen <90 Epäillään 90-100	Remission Taudin paheneminen Taudin akuutti vaihe Ei infektio (tauti) Taudin akuutti vaihe Toista analyysi 2-3 viikon kuluttua
Herpes simple 1,2 serotyypit Anti-HSV 1/2 yhteensä. (100-900%)	Positiivinen 100-400 Positiivinen 400-800 Positiivinen> 800 Negatiivinen <100	Remission Taudin paheneminen Taudin akuutti vaihe Ei infektiota (tauti)

Taulukossa on esitetty tärkeimmät menetelmät herpesvirusinfektioiden laboratoriodiagnostiikalle sekä suositellut biologiset materiaalit, joita tutkitaan HSV: n eristämiseksi, ottaen huomioon herpeksisten leesioiden lokalisointi

Luotettava on herpes simplexin ja CMV: n allokointi herkkien soluviljelmien kautta. Niinpä 26 potilaan virologisessa tutkimuksessa relapsin aikana HSV eristettiin herkällä Vero-soluviljelmällä 23 tapauksessa (88,4%). Tartunnan saaneissa viljelmissä havaittiin HSV: n ominaisuuksiltaan sytopat- tisen toiminnan mallia - monisoluisten jättisolujen muodostumista tai pyöristettyjen ja suurennettyjen solujen kerääntymistä nippujen muodossa. 52,1%: lla tapauksista oli mahdollista havaita viruksen sytopaattisen vaikutuksen foci 16-24 tunnin kuluttua infektiosta. Tartunnan saaneiden viljelmien 48-72 tunnin inkuboimalla tiettyjen solujen tuhoutumista aiheuttavien aineiden prosenttiosuus kasvoi 87 prosenttiin. Ja vain 13% tapauksista havaittiin positiivisia tuloksia 96 tuntia infektion jälkeen ja enemmän tai toistuvasti.

Yleistyneen herpetisen infektion laboratoriodiagnoosi

Tärkeimmät menetelmät herpesvirusten, niiden hiukkasten ja niiden osien havaitsemiseksi (eristäminen)	Apupohjaiset menetelmät, joilla pyritään havaitsemaan vasta-aineita herpesviruksille biologisissa nesteissä havaitsemalla entsymaattiset muutokset veriseerumissa
Eristäminen herpesvirus herkkiin soluviljelmiin ja eläinten suora ja immunoelektronimikroskopialla suora ja epäsuora immunoperoksidaasimenetelmää suoritusmuodoissa suora ja epäsuora fluoresoiva vasta-tekniikka vaihtoehtoja vaihtoehtoja ELISA Esillä molekyylipainon (DNA-DNA) hybridisoidaan Polymerase Chain Reaction Reaction lateksiagglutinaatio	Neutralointi reaktio komplementtifiksaatioreaktiotestin reaktio lateksiagglutinaatio Epäsuora fluoresoiva vasta-aine menetelmä suoritusmuodossa Epäsuora immunoperoksidaasimenetelmää variantti suoritusmuotojen ELISA- menetelmä immuunivasteen blotting säteen komplementin fiksaatio Menetelmä määrittäminen alaniinia ja aspartaattitasoja

Tarttuvan mononukleoosin (VEB: n aiheuttaman infektion) diagnosointiin käytetään serologisia menetelmiä. Reaktio Paul-Bunnelya kanssa lampaan punasoluja, tiitteri 1:28, Diagnostic ja edellä yksittäisessä tutkimuksessa seerumin, tai 4-kertainen vasta-aineen lisäys, kun tarkastellaan pariseerumeiden. Käytä Goff-Bauer-reaktiota suspensioon, jossa on hevosen 4% virallistettuja punasoluja. Tulos otetaan huomioon 2 minuutin kuluttua, infektoivan mononukleoosin takia reaktio on hyvin spesifinen.

Tällä hetkellä kehitetään entsyymi-immunoanalyysi (ELISA) infektoivan mononukleoosin diagnosoimiseksi. Tässä tapauksessa IgG- ja IgM-vasta-aineet potilaan seerumissa määritetään inkuboimalla EBV: llä infektoituneilla lymfoblasteilla, jota seuraa käsittely fluoresoivilla vasta-aineilla. Taudin akuutissa ajanjaksossa virusapididigeenin vasta-aineet määritetään titterillä 1: 160 ja yli.

Kun käytetään useita tuotujen kaupallinen testi järjestelmät IFA voidaan tunnistaa vasta-aineita, ant Egan EBV-vaippavasta-aineita varhaiseen antigeeni EBV, koko vasta-aineen varhaisessa antigeeni EBV, määritetään akuutin sairauden ja tumassa ja sytoplasmassa, ja rajoitettu vasta- EBV aikaisin, määritetään akuutin sairauden ja tumassa ja sytoplasmassa soluissa, joita rajoittaa vasta-aineita EBV aikaisin antigeeni, määritetään keskellä taudin ainoastaan solujen sytoplasmassa, ja vasta-aineita EBV-tuma-antigeeni. Näiden testijärjestelmien käyttö mahdollistaa useiden EBV: n liittyvien sairauksien erilaistumisen diagnosoinnin.

Sen jälkeen, kun positiivinen ELISA tunnistaa vasta-EBV antaa immunoblot vahvistaa vastauksen, joka tunnistaa vasta-aineiden läsnäolo erottaa EBV markkeriproteiinien (p-proteiinien): P23, P54, p72 (läsnä proteiinin olettaa mahdollisuuden lisääntymisen EBV), s 138. Said edellä mainittuja laboratoriomenetelmiä käytetään hoidon tehon hallintaan.

Virologisten menetelmien herkkyys on 85 - 100%, spesifisyys on 100%, tutkimusaika on 2-5 päivää. Usein käytännössä menetelmässä suoralla immunofluoresenssilla (PIF) kanssa polyklonaalisia tai monoklonaalisia vasta-aineita vastaan HSV-1 ja HSV-2. UIF-menetelmä voidaan helposti toistaa tavanomaisessa kliinisessä laboratoriossa, se ei ole kallista, herkkyys on yli 80%, spesifisyys on 90-95%. Immunofluoresoivalla mikroskopia paljasti, että läsnä sytoplasmisten sulkeumia, morfologisia ominaisuuksia, prosenttiosuus infektoitujen solujen leviää, kaapii virtsaputken, kohdunkaulan kanava, kohdunkaula, peräsuoleen.

UIF-menetelmä antaa käsityksen solujen morfologisista ominaisuuksista ja muutoksista HSV-antigeenien lokalisoinnissa. Herpesvirusten välittömien merkkien lisäksi (spesifisen luminesenssin havaitseminen) lisäksi on epäsuoria merkkejä herpesi-infektiosta UIF-tietojen mukaan:

• ydinaineksen yhdistäminen, karyoolman kuorinta;
• läsnäolo ns. Ytimiä "reikiä", kun vain yksi karyolemma jää solun ytimestä;
• intranukleaaristen sulkeumien esiintyminen - Caudryn vasikka.

Kun asetat UIF lääkäri saa paitsi laatua, mutta myös määrällinen arviointi tartunnan saaneiden solujen, että meillä on käytetty tehokkuuden arvioimiseksi viruslääkitystä acyclovir (AC). Näin ollen 80 potilasta, joilla oli yksinkertainen sukupuolielinten herpes (GG), tutkittiin UIF-menetelmällä dynamiikassa. On osoitettu, että jos, ennen käsittelyä asikloviirin tahroja 88%: lla potilaista oli korkea prosenttiosuus infektoitujen solujen (50-75% ja yli), sen jälkeen kun yksi kurssi asikloviirin irtosolunäytteiden 44%: lla potilaista, joilla terveiden solujen havaittiin 31%: ssa tapauksista on merkitty yksittäisten infektoituneita soluja ja 25%: lla potilaista oli jopa 10% tartunnan saaneista soluista.

Asikloviirilla hoidettujen potilaiden, joilla on sukupuolielinten herpes, tartunnan saaneiden solujen pitoisuudet (PIF-reaktio)

Sairausjaksot	Prosenttiosuus
	Infektoituneita soluja					Normaaleja soluja
	Yli 75%	50-75%	40-50%	10%	Yksittäiset solut n / sp
Relapse (ennen hoitoa)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remissio (hoidon jälkeen)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Monien vuosien UIF: n ja pistehybridisaation menetelmän avulla lähes 100% tapauksista oli samansuuntaisia kuin tutkimuksen tulokset. On huomattava, että lisäämiseksi luotettavuuden diagnoosin GH, erityisesti silloin, kun on piilevä ja malomanifestnyh muotoja herpes, on suositeltavaa käyttää 2-3 menetelmää laboratoriodiagnoosien, varsinkin tarkasteltaessa raskaana, naiset synnytykseen historiaa epäedullisessa asemassa, ihmiset määrittelemätön gynekologisia diagnoosin.

Näin ollen PCR-diagnoosi virus- ja bakteeri-infektioiden urogenitaalialueen on välttämätöntä arvioida positiivisia tuloksia, jotka on saatu historia, läsnä ollessa (tai puuttuminen) erityisiä kliinisiä oireita. Jos klamydiaa havaitaan PCR: llä, tässä tapauksessa on mahdollista puhua infektioista ja hoitaa hoidon ongelmat vastaavasti. Jos havaitaan mykoplasmat (ureaplasmas) ovat opportunistisia patogeenejä, diagnoosin varmistamiseksi on tarpeen suorittaa kulttuuri lisätutkimuksia, t. E. Crop materiaalia potilaan herkkä soluviljelmiin. Vain kun positiiviset tulokset saadaan viljelyanalyysissä, voimme puhua laboratorion vahvistuksesta mykoplasmoksen diagnoosissa. Sama menetelmä mahdollistaa tarvittaessa eristetyn mykoplasman herkkyyden määrittämisen usein käytetyille lääkemuodoille (antibiootit, fluorokinolonit jne.).

Ehkä yhden vaiheen infektio, jossa on useita Nepresviridae-perheen viruksia. Usein havaitsimme yhden potilaan infektiota HSV-1, HSV-2 ja CMV-viruksilla. Useammin useilla herpesviruksilla tartunnan saaneilla potilailla oli kliinisiä ja laboratoriotutkimuksia sekundaarisen IDS: n (potilaat, joilla on onemiologiset, onkologiset, HIV-infektoituneet). Siten on osoitettu, että HIV-infektiossa etenevien kliinisten ja immunologisten häiriöiden mukana seuraa molekyylirysybridointimenetelmän avulla havaittujen herpesvirusten määrä. Tässä prognostisesti merkittävintä voidaan pitää HSV-1: n, CMV: n ja HHV-6-tyypin DNA: n monimutkaisena yksiportaisena detektiota.

[1], [2], [3]